非洲豬瘟病毒檢測試劑盒（PCR熒光探針法）

非洲豬瘟病毒檢測試劑盒（PCR熒光探針法）免核酸提取，快速檢測。*農業部認可的免核酸提取專門的一家。
【產品名稱】
通用名稱：非洲豬瘟病毒檢測試劑盒（PCR熒光探針法）
英文名稱：African Swine Fever virus Detection Kit (Real-Time PCR Method)
【包裝規格】 & 50T/盒
【預期用途】
本試劑盒適用于非洲豬瘟病毒檢測，可用于臨床非洲豬瘟病毒感染的輔助診斷，但不作確診使用。
【檢驗原理】    
本試劑盒針對非洲豬瘟病毒的高度保守區域設計特異性引物和探針，在反應體系中含非洲豬瘟病毒基因組模板的情況下，PCR反應得以進行并釋放熒光信號。利用熒光定量PCR儀對PCR過程中相應通道信號進行實時監測和輸出，實現檢測結果的定性分析。
【主要組成成份】
序號    組成      50T/盒
1    ASFV  PCR反應液      1100 μL/管
2    ASFV 陽性對照         100 μL/管
3    ASFV 陰性對照         100 μL/管

4   樣本稀釋液              12 mL×2管
5    樣本裂解液              1500uL/管
注：陰性對照為豬基因組DNA，陽性為非洲豬瘟經滅活處理的核酸提取物。
【儲存條件及有效期】樣本稀釋液保存2~8度。其余避光-20℃+—5度保存，避免反復凍融，有效期12個月。
【適用儀器】Bio-Rad系列、卡尤迪生物科技MINI8全系列 、等多通道實時熒光定量PCR儀。
【檢驗方法】
1.    試劑準備（試劑準備區）
（1）從冰箱中取出試劑盒, 從試劑盒中取出實驗所需試劑,充分融化混勻5秒，并瞬時離心5秒，以去除管壁附著液體。
2.樣本準備（樣本處理區）
具體操作請來電咨詢本故事。

4. PCR（PCR擴增區）
（1）取樣本處理區準備好的PCR反應管，放置在實時熒光定量PCR儀樣品槽相應位置，并記錄放置順序。
（2）按下表設置儀器核酸擴增相關參數進行PCR擴增。
 
反應體積    25 μL    通道選擇    FAM通道采集非洲豬瘟病毒熒光信號
PCR
反應
條件    步驟    條件    循環數
    UNG處理        95℃：1分鐘（min）    15
    預變性    55℃：1分鐘（min）    1  cycles
    預擴增    95℃：1分鐘（min）    1
      PCR擴增    95℃：5秒（s）    30 cycles
        60℃：  15秒（s）
（此階段結束時采集熒光信號）    

注：ABI系列熒光PCR儀在設置時不選ROX校正，設置淬滅基團選擇None。
【參考值（參考范圍）】
1.試劑盒有效性判定：
 （1）陽性對照：有典型S型擴增曲線或Ct值≤23。
 （2）陰性對照：無S擴增曲線。
2.標本結果判定：
（1）陽性：標本檢測結果Ct值≤23或有明顯指數增長期。
（2）可疑：標本檢測結果Ct值在23～30范圍內。此時應對標本進行重復檢測，如重復實驗結果Ct值仍在30范圍內，有明顯指數增長期，則判定為陽性，否則為陰性。
（3）陰性：標本檢測結果Ct值＞38或無Ct值。
【檢驗結果的解釋】
通道及檢測結果    標本檢測結果解釋
FAM    
陽性（＋）    標本中檢出非洲豬瘟病毒DNA
陰性（－）    標本中未檢出非洲豬瘟病毒DNA
【檢驗方法的局限性】
1.    當檢測樣本中被檢核酸濃度低于本試劑盒的*低檢出限時可能會發生假陰性的結果。
2.    被檢樣本在采集、運輸、儲存以及處理過程中操作方式不當容易造成DNA降解而產生假陰性結果。
3.    樣本在采集、運輸、儲存以及處理過程中發生交叉污染，則容易得到假陽性結果。

【注意事項】
1.    整個檢測過程應嚴格按照本說明書要求分別在試劑準備區、樣本處理區和PCR擴增區進行操作，各區實驗服、儀器、耗材應獨立使用，不能混用；實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區應配有生物**柜，樣本處理在生物**柜中進行操作；三個區應該配有紫外線**裝置。
2.    為避免DNA降解，樣本處理過程應在0-4℃條件下操作，且完成實驗后立即上機檢測；樣本處理過程中使用的器具耗材應經過無核酶處理。
3.    每次實驗應該設置陰、陽性對照。
4.    試劑盒所有試劑在使用前應該在常溫下充分融化混勻，并應瞬時離心。
5.    試劑盒內所配陰性和陽性對照在**次使用前應全部轉移至標本準備區，并單獨存放。
6.    為防止熒光干擾，應避免裸手直接接觸PCR反應管，并應避免在PCR反應管上進行任何標記。
7.    儀器擴增相關參數應按照本說明書相關要求進行設置；不同批號試劑不能混用。
8.    ABI系列熒光定量PCR儀參數設置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。
9.    實驗過程中產品的廢棄物應該進行無害化處理后方可丟棄。

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